一、什么是動(dòng)脈粥樣硬化
動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種炎癥性、多階段的退行性的復(fù)合性病變，病理變化十分復(fù)雜，至今沒有得到完全的闡明。20世紀(jì)90年代美國(guó)科學(xué)家Ross提出動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的損傷學(xué)說，即動(dòng)脈粥樣硬化是在損傷因子的作用下導(dǎo)致的一個(gè)慢性炎癥的過程，指套包括四期的病理變化：動(dòng)脈血管內(nèi)膜功能紊亂期，血管內(nèi)膜脂質(zhì)條紋期，典型斑塊期和斑塊破裂期。動(dòng)脈周天硬化的病程是從受累動(dòng)脈的內(nèi)膜受損開始，先后出現(xiàn)局部脂質(zhì)條紋、平滑肌細(xì)胞的遷移增生、纖維分泌，直至在動(dòng)脈內(nèi)膜形成以脂質(zhì)為核心，外有纖維帽包裹的典型斑塊。由于動(dòng)脈內(nèi)膜聚集的脂質(zhì)斑塊外觀呈黃色粥樣，故稱為動(dòng)脈粥樣硬化。形成的斑塊有穩(wěn)定性斑塊和易損性（不穩(wěn)定）斑塊兩種類型。
二、引起動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因
動(dòng)脈粥樣硬化的病因尚不完全清楚，但高脂血癥或高脂蛋白血癥與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生密切相關(guān)。目前認(rèn)為除了遺傳、年齡、肥胖、吸煙、機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高和缺乏體力活動(dòng)等危險(xiǎn)因素外，人類所吃的食物在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病中起著極為重要的作用，尤其是高能量和高脂肪的食物。目前大多研究認(rèn)為甘油三酯是動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
三、動(dòng)脈粥樣硬化對(duì)健康的主要危害
冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病是動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致器官病變的最常見疾病，也是嚴(yán)重危害人類健康的常見疾病。過去認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致心肌梗死和心力衰竭，但是近年來的研究認(rèn)為易損性斑塊的破裂還是導(dǎo)致脈管綜合癥以及死亡的主要原因。動(dòng)脈沉積斑表面有一層稱作為“蓋子”的細(xì)胞（纖維帽），將沉積斑的核與流經(jīng)沉積斑的血分隔開。在易損性斑塊中（比較危險(xiǎn)的沉積斑），表面的這層“蓋子”細(xì)胞既薄且脆。在血流的沖擊下，蓋層很容易破碎。粥樣沉積斑一旦破碎，破碎的碎片會(huì)混入血液。血流開始在沉積斑破碎的部位凝集，這種凝集發(fā)生咋速度非?？?，能迅速的堵塞整個(gè)動(dòng)脈血管。當(dāng)動(dòng)脈血管在短時(shí)間被堵塞時(shí)，血流沒有時(shí)間形成其他路徑。這種情況發(fā)生后，破裂處下游的血流量急劇減少，心肌不能得到足夠的氧氣，這時(shí)心肌細(xì)胞開始死亡，心臟的搏動(dòng)機(jī)能開始衰退，患者會(huì)感到胸部劇痛，或先是肩膀部有灼痛感，然后向上傳導(dǎo)至脖子和下巴處。簡(jiǎn)單說，患者開始進(jìn)入死亡狀態(tài)。
現(xiàn)在知道了動(dòng)脈粥樣硬化是如何到時(shí)心臟病的，動(dòng)脈斑的破裂是最致命的。那么人類怎么才能預(yù)測(cè)心臟病發(fā)作的時(shí)間呢？不幸的是，按照人類現(xiàn)有的技術(shù)條件，還做不到預(yù)測(cè)心臟病的發(fā)作時(shí)間。不知道什么時(shí)候沉積斑會(huì)破裂，哪些沉積斑會(huì)破裂，或情況可能有多嚴(yán)重。但是事實(shí)證明了心臟病發(fā)作的相對(duì)危險(xiǎn)度。因而預(yù)防斑塊的形成、促進(jìn)斑塊的消退和提高斑塊的穩(wěn)定性是動(dòng)脈粥樣硬化防治的主要策略，也是預(yù)防冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的主要途徑。
四、普洱茶坑動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究
人類高脂血癥與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病密切相關(guān)。降低血漿的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），升高血漿高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的措施顯示能夠降低動(dòng)脈冠心病的發(fā)生和死亡率。目前臨床治療動(dòng)脈粥樣硬化主要措施就是改善血脂。膳食和營(yíng)養(yǎng)因素與血脂的變化密切相關(guān)，控制飲食和改善營(yíng)養(yǎng)狀況已成為防治動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的重要途徑。
本書第一章介紹過，高脂血癥可以分成原發(fā)性與繼發(fā)性兩類，即原發(fā)生性高脂血癥和繼發(fā)性高脂血癥。遺傳因素引起高脂血癥屬原發(fā)性高脂血癥，可能發(fā)生在細(xì)胞水平上，主要表現(xiàn)為細(xì)胞表面脂蛋白受體缺陷以及細(xì)胞內(nèi)某些酶的缺陷（如脂蛋白脂酶的缺陷或缺乏），也可能發(fā)生在脂蛋白代謝異常疾病，如家族性異常脂蛋白血癥發(fā)病率為1/10000，是由于ApoE的特殊突變導(dǎo)致CM及VLDL的代謝殘余與脂蛋白受體正常連接受阻。本實(shí)驗(yàn)則是一普洱茶作為供試材料，采用ApoE基因敲除小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物模型(apolipoproteinEgeneKnockout,ApoE-/-),為目前國(guó)際上公認(rèn)的試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛣?dòng)物。這種基因敲出小鼠血漿膽固醇濃度為正常小鼠的5倍。即使在普通飼料喂養(yǎng)條件下，也可以形成動(dòng)脈粥樣硬化幾乎所有階段的發(fā)病，并與人類的病變非常相似。期望通過這個(gè)試驗(yàn)，探討普洱茶坑ApoE基因敲除小鼠高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化的作用，以期為普洱茶防治遺傳因素相關(guān)的人類高脂血癥和動(dòng)脈粥樣硬化提供試驗(yàn)依據(jù)。
方法：
ApoE（-/-）小鼠8周齡雄性40只（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)可許號(hào)：SCXK(京)2006-0008），購(gòu)自北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。8周齡雄性C57/6J小鼠10只（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(渝)2007-0008），購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院。在SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室用全價(jià)顆粒飼料飼養(yǎng)（飼料生產(chǎn)許可證SCXK(滇)2005-2009）。適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為ApoE（-/-）對(duì)照組以及ApoE（-/-）普洱生、熟茶組和市售品藥物對(duì)照組，并設(shè)ApoE（+/+）對(duì)照組。對(duì)照組給予蒸餾水，干預(yù)組給予普爾生茶、熟茶30mg/kg.bw,市售降脂中藥10mg/kg.bw，每天經(jīng)口灌胃，連續(xù)3個(gè)月。
試驗(yàn)期間每天觀察小動(dòng)物外觀特征、行為活動(dòng)、皮毛、呼吸、五官、外生殖器官及糞便性狀等。每周測(cè)體重一次，根據(jù)體重變化調(diào)整給予量。3個(gè)月后，所有動(dòng)物禁食不禁水過夜，次日犧牲動(dòng)物，收集全血2~3ml與5ml離心管中，以3000r/min離心15min，制備清血，零下20攝氏度凍存。檢測(cè)小鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。計(jì)算動(dòng)脈硬化指數(shù)（AI），檢測(cè)hs-CRP；解剖取主動(dòng)脈等進(jìn)行病理組織檢查。
試驗(yàn)研究結(jié)果
1.普洱茶可明顯降低有遺傳因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)動(dòng)物的體重
ApoE（-/-）對(duì)照組和各干預(yù)組體重、肝臟重量均大于ApoE（+/+）對(duì)照組，說明本研究的試驗(yàn)小鼠已經(jīng)開始出現(xiàn)病變。與ApoE（-/-）對(duì)照組相比，灌胃普洱茶8周后ApoE（-/-）普洱生茶組體重顯著減輕，12周后普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品藥物組體重、肝臟重量均有減輕，但肝臟系數(shù)未見差異；
2.普洱茶可有調(diào)節(jié)由遺傳因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)動(dòng)物的血脂水平
ApoE（-/-）對(duì)照組和各干預(yù)組總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）以及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）均高與ApoE（+/+）對(duì)照組。與ApoE(-/-)對(duì)照組相比，普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品藥物組總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）均顯著降低，說明普洱生茶和普洱熟茶均可有效降低由遺傳性因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)動(dòng)物的血脂水平。
3.普洱茶可顯著降低由遺傳因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠的動(dòng)脈硬化指數(shù)
ApoE（-/-）對(duì)照組和各干預(yù)組動(dòng)脈硬化指數(shù)大于ApoE（+/+）對(duì)照組。與ApoE（-/-）對(duì)照組相比，普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品藥物組動(dòng)脈硬化指數(shù)均顯著降低，提示普洱茶可顯著降低由遺傳性因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠的動(dòng)脈硬化指數(shù)，能夠有效阻止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。
4.普洱茶可顯著降低有遺傳因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)
C-反應(yīng)蛋白是由人體中的肝細(xì)胞所產(chǎn)生的特殊蛋白，為發(fā)炎反應(yīng)的指標(biāo)。近年的研究發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)脈粥樣硬化的形成過程中，發(fā)炎反應(yīng)扮演這重要的角色。發(fā)炎指標(biāo)也是評(píng)估心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的重要因子，而hs-CRP是目前應(yīng)用最普遍的，它可以作為心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。高濃度的hs-CRP會(huì)影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的特征，造成組織的損傷。從動(dòng)脈粥樣硬化一開始的脂肪紋到發(fā)炎細(xì)胞的浸泡及內(nèi)皮細(xì)胞功能的破環(huán)，甚至到最后硬化斑的破裂等，hs-CRP都參與其中。
本研究發(fā)現(xiàn)ApoE（-/-）對(duì)照組和各干預(yù)組血清hs-CRP高于ApoE（+/+）對(duì)照組，說明試驗(yàn)小鼠已經(jīng)出現(xiàn)了動(dòng)脈粥樣硬化的病變。采用普洱生茶和熟茶灌胃3個(gè)月后，與ApoE（-/-）對(duì)照組相比，普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品組試驗(yàn)小鼠血清hs-CRP均顯著降低，說明普洱茶可顯著降低試驗(yàn)小鼠血清中的hs-CRP含量。
5.普洱茶可明顯減少由遺傳因素引起的動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠粥樣斑塊的形成
本研究對(duì)試驗(yàn)小鼠的主動(dòng)脈進(jìn)行了病理檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoE（+/+）對(duì)照組主動(dòng)脈壁厚薄均勻，內(nèi)膜、中膜和外膜未見異常ApoE（-/-）對(duì)照組可見大量泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶形成的粥樣斑塊期病變，內(nèi)膜完整性破環(huán)，大量泡沫細(xì)胞形成和堆積，突向管腔；普洱生茶組和普洱熟茶組動(dòng)脈粥樣硬化程度與ApoE（-/-）對(duì)照組相比明顯減輕，內(nèi)膜輕度隆起和增厚，泡沫細(xì)胞減少為了得到更準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果，本研究還對(duì)試驗(yàn)小鼠的主動(dòng)脈病理切進(jìn)行電鏡觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoE（+/+）對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)吞飲小泡正常；對(duì)照主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞水腫變性，體積增大，胞質(zhì)疏松，內(nèi)皮細(xì)胞壞死脫落，完整性破壞，細(xì)胞間隙增寬，胞漿內(nèi)可見大量吞飲小泡；普洱生茶組與普洱熟茶組內(nèi)皮細(xì)胞排列較為規(guī)則，病變程度較輕。說明普洱茶在預(yù)防動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化方面起到一定作用。
五、普洱茶防治動(dòng)脈粥樣硬化的優(yōu)勢(shì)分析
以往的大小鼠等動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型多采用高脂飼料長(zhǎng)期飼養(yǎng)，由于大小鼠等動(dòng)物先天具有抵抗膽固醇的特性，在制作模型時(shí)膽固醇負(fù)荷往往是數(shù)十倍與正常膳食得到急性過程，這與人類實(shí)際的慢性高脂血癥情況相差甚遠(yuǎn)。ApoE基因敲除小鼠亦稱ApoE基因缺陷小鼠，其血漿含膽固醇豐富的殘粒清除受阻，喂飼普通飼料即可出現(xiàn)高膽固醇血癥，并自發(fā)地形成纖維斑塊和復(fù)合斑塊，且斑塊的分布與人類動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的分布極為相似。ApoE（-/-）小鼠在5~6周齡時(shí)主要是單核細(xì)胞趨附于損傷的內(nèi)皮細(xì)胞處，8~10周齡脂質(zhì)條紋逐漸形成，15~20周齡后逐漸出現(xiàn)纖維斑塊，粥樣斑塊大約在25~30周齡左右逐漸形成，35周齡以后，粥樣斑塊有出血、斑塊破潰、血栓形成等各種并發(fā)癥，甚至有的小鼠因急性心腦血管事件自發(fā)死亡。病變部位一主動(dòng)脈根最為明顯，其次為胸主動(dòng)脈。ApoE（-/-）小鼠體內(nèi)存在著嚴(yán)重的脂質(zhì)代謝紊亂，人動(dòng)脈粥樣硬化各階段的病理表現(xiàn)均可見于模型中。因此，目前它已成為研究動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的細(xì)胞與分子機(jī)制和研究治療手段的極佳實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
本試驗(yàn)采用ApoE基因敲除小鼠，檢測(cè)了普洱茶干預(yù)前后血脂和hs-CRP水平、AI值變化、主動(dòng)脈病理變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與ApoE（-/-）對(duì)照組相比，普洱生茶和普洱熟茶組TC、TG、LDL-C和hs-CRP水平以及AI值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示普洱茶有降低血脂中TC、TG和LDL-C的作用，降低體內(nèi)的炎癥介質(zhì)水平，減輕主動(dòng)脈粥樣硬化損傷程度及AI值，得出普洱茶具有抗ApoE基因敲除小鼠（-/-）動(dòng)脈粥樣硬化作用的結(jié)論。完成了遺傳因素到飲食因素普洱茶原發(fā)性高脂血癥的作用研究。一般來說，高脂飲食性高脂血癥可以通過控制高脂、高膽固醇等的攝入，加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)來調(diào)節(jié)，但遺傳因素引起的往往較難控制。為什么普洱茶既對(duì)高脂飲食大鼠模型，又對(duì)ApoE基因敲除小鼠模型有作用呢？還需要進(jìn)一步的探討。
本文主編：邵宛芳教授《首本科學(xué)詮釋普洱茶保健功效科普讀物》
